جداسازی و کشت سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی برههای نر قزل و تاثیر ال گلوتامین و ترهالوز در انجماد آن
نام نخستين پديدآور
مسعود صدیقی
وضعیت نشر و پخش و غیره
نام ناشر، پخش کننده و غيره
کشاورزی
تاریخ نشرو بخش و غیره
۱۴۰۱
مشخصات ظاهری
نام خاص و کميت اثر
۶۷ص.
مواد همراه اثر
سی دی
یادداشتهای مربوط به پایان نامه ها
جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن
کارشناسی ارشد
نظم درجات
علوم دامی، گرايش فیزیولوژی دام و طیور
زمان اعطا مدرک
۱۴۰۱/۰۶/۲۹
یادداشتهای مربوط به خلاصه یا چکیده
متن يادداشت
سلولهای بنيادی، سلولهایی هستند که توانایی تبدیل و تمایز به انواع مختلف سلولهای دیگر را دارند و از آنها میتوان در توليد سلولها و نهایتا بافتهای دیگر استفاده کرد. این سلولها توانایی خودنوسازی را نيز دارند. از بين سلولهای بنيادی، سلولهای بنيادی اسپرماتوگونی منحصر به فرد بوده، چون، تنها سلولهای بدن هستند که با تقسيم خود میتوانند ژنها را به نتاج منتقل نمایند. در نتيجه، این سلولها، منابع ارزشمند جهت مطالعات بيولوژیكی، پژوهشهای پزشكی، فناوری توليدمثل دامی و اصلاح ژنتيكی از طریق دستكاری سلولهای زایندهی نر میباشند. بنابراین، روشهای مناسب جداسازی، خالص سازی، کشت، شناسایی و انجماد این سلولها اهميت ویژه ای دارند که در این مطالعه مورد آزمایش قرار میگيرند. در پژوهش حاضر، نمونهها از مجموع 4 راس بره نر نابالغ قزل با استفاده از روش TESE اخذ شده و به آزمایشگاه منتقل شدند و بعد از یک مرحله هضم مکانیکی و دو مرحله هضم آنزیمی، سلولها جداسازی شده و با استفاده از روش همکشتی با سلولهای سرتولی، کشت داده شدند. فلاسکهای کشت داده شده در روزهای 4، 8 و 12 از نظر تعداد ، مساحت کلونیها و درصد زنده مانی کلونیها ارزیابی شدند. از آزمونهای ایمنوسيتوشيمی برای شناسایی سلولها و تایيد ماهيت آنها استفاده شد. به نحوی که برای سلولهای اسپرماتوگونی، Oct-4 و برای سلولهای سرتولی، ویمنتين مورد استفاده قرار گرفت. برای انجماد سلولها از 70 درصد FBS ، 10 درصد DMSO و 20 درصد DMEM، دو سطح ال گلوتامين (5/2 و 5 میلیمولار) و دو سطح ترهالوز (50 و 100 میلیمولار) استفاده شد. بعد از یک ماه انجماد، سلولها یخ گشایی شده و دوباره کشت داده شدند. فلاسکهای کشت داده شده در روزهای 4،8 و12 از نظر تعداد، مساحت کلونیها و درصد زنده مانی ارزیابی شده و در نهایت دادهها بعد از انجماد با استفاده از نرم افزارSAS آناليز شدند. نتایج مطالعه انجام شده، نشان دادند که افزودن 50 میلیمولار از ترهالوز در محیط انجماد سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی به طور معنیداری سبب افزایش تعداد، مساحت کلونی و درصد زندهمانی اسپرماتوگونی میشود. در بین تیمارهای مورد استفاده ترهالوز 100 میلیمولار بالاترین درصد زندهمانی را نشان میدهد. به طور کلی میتوان نتیجه گرفت که استفاده ازآنتیاکسیدان و قندها در فرایند انجماد میتواند، رشد و زندهمانی سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی را با مکانیسمهای مختلف افزایش دهد.
متن يادداشت
Abstract: Stem cells are cells that have the ability to transform and differentiate into different types of other cells and they can be used in the production of cells and ultimately other tissues. Among stem cells, spermatogonial stem cells are unique, because they are the only body cells that can transfer genes to future generation by dividing. As a result, these cells are valuable resources for biological studies, medical research, animal reproduction technology and genetic modification through the manipulation of male germ cells. Therefore, the appropriate methods of isolation, purification, culture, identification and freezing of these cells are of special importance and are tested in this study.In this study, the samples were taken using the TESE method and transferred to the laboratory, and after two stages of enzymatic digestion, the cells were isolated and cultured by using the co-culture method with Sertoli cells. Cells were identified using immunocytochemistry. Vimentin and Oct-4 immunocytochemical staining method, respectively identified Sertoli cells and SSCs. Different concentration of terhalose (50, 100 mM) and L-glutamine (2.5, 5 mM) were used for cryopreservation of cells. After one month freezing, the cells were thawed and cultured again. The number and surface of colony and viability of cells were evaluated in the days 4, 8 and 12 after co-culturing. The data after cryopreservation steps was comparison and analyzed by SAS software. The results showed that the addition of 50 mM of trehalose in the freezing medium of spermatogonial stem cells significantly increases the number, colony area and survival percentage of spermatogonial cells. Among the treatments used, trehalose 100 mM shows the highest percentage of survival. In general, it can be concluded that the simultaneous use of antioxidants and sugars in the freezing process can increase the quality and survival of spermatogonial stem cells by different mechanisms.
عنوانهای گونه گون دیگر
عنوان گونه گون
Isolation and Culture of Spermatogonial Stem Cells of Ghezel Ram and Effect of L-Glutamine and Terhalose in Cryopreservation.
نام شخص به منزله سر شناسه - (مسئولیت معنوی درجه اول )